外周血干细胞(骨髓)移植现状

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　　PBSCT Periphery blood stem cell transplantation丽水市人民医院血液科方炳木
　　
　　摘要：外周血造血干细胞移植（PBSCT）是造血干细胞移植的一种，又分为自体PBSCT和异基因PBSCT。本文就外周血干细胞/祖细胞的检测要领、常用的带动要领以及自体PBSCT中的净化问题，异基因 PBSCT与异基因骨髓移植的黑白和非血缘PBSCT做一个简要介绍。FM认证
　　
　　一、 提要

　　近几十年来，跟着临床与尝试血液学及相关学科的迅速成长，出格是对造血干细胞特性及造血与调控的深入研究，人们对移植免疫学的深入认识，人类白细胞抗原（HLA）配型技术的进展、血液成品及抗生素等支持疗法的进展、全情况掩护治疗的应用出格是血细胞疏散机及多种造血细胞发展因子的遍及应用，极大的敦促了外周血造血干细胞移植的迅猛成长，现已成为治疗白血病、部门恶性实体瘤等的主要治疗方法之一。

　　目前，造血干细胞移植按造血干细胞来源可分为

　　（1）骨髓移植

　　（2）外周血造血干细胞移植（PBSCT）

　　（3）胎盘/脐带血造血干细胞移植。

　　按移植物免疫学特征可分为

　　（1）自体移植（auto-SCT）

　　（2）异基因移植（allo-SCT）

　　（3）同基因移植（syn-SCT）

　　（4）异种移植（Xeno-SCT）。
　　
　　外周血造血干细胞移植（PBSCT）是造血干细胞移植中的一种，又可分为自体PBSCT（auto- PBSCT）、异基因PBSCT（Allo-PBSCT）。主要通过收罗经过带动后的外周血中的造血干/祖细胞作为移植物移植给受者，使其成立起正常的造血与免疫成果，与骨髓一样，收罗到的外周血中的血细胞身分包罗种种造血祖细胞、各个分化阶段的血细胞及成熟的血细胞。
　　
　　二、 外周血造血干细胞移植历史
　　
　　早在60年代初期，人们在为化疗后的细胞减少患者输注人体的细胞时，偶然发此刻输注慢性髓性白血病（CML）患者外周血后呈现一过性ph染色体阳性细胞，从而提示外周血中含有造血干细胞。1975年Richman发明化疗后恶性实体肿瘤患者化疗后，外周血中造血细胞集落形成细胞呈一过性增加。1977年Goldman等对CML患者收罗未经带动的外周血造血干细胞并冷冻生存，在患者急变后行的外周血造血干细胞移植，开创了外周血造血干细胞移植的先河。1980年Rich为一例严重联合免疫缺陷患者进行异基因外周血造血干细胞移植。80年代后期，跟着血细胞疏散技术的改造，造血细胞因子（如 G-CSF、GM-CSF)的临床应用，造血干细胞的迅速成长，PBSCT得以迅速成长。我国在 1989年首先开展了auto-PBSCT，1996年乐成开展了异基因外周血造血干细胞移植。
　　
　　三、外周血造血干/祖细胞的检测要领
　　
　　收罗、输注足够数量的造血干/祖细胞是担保PBSCT乐成的重要环节。因此，准确评价收罗物中造血干/祖细胞的数量也是PBSCT中的要害问题之一。
　　
　　1、造血细胞体外集落形成单元的测定
　　
　　通过体外半固体培养的要领测定造血干/祖细胞集落形成单元。常用的为粒-单系集落形成单元（CFU-GM，colony forming units-granulocyte-macrophage），目前多回收甲基纤维素法测定。简而言之，将收罗到的单个核细胞（MNC）洗净两次，培养细胞数以2X103- 2X104个为宜，在0.8Gv/v甲基纤维培养体系中，插手小牛血清，适合浓度的细胞因子（GM-CSF），也可插手其他细胞因子（如IL-5，IL-6，SCF等）如要培养CFU-mix，可加Epo、Tpo 等，在CO2培养箱中培养14天，计数集落数。凡是PBSCT所需CFU-GM数为≥2X105/kg。
　　
　　2、Long-term culture-initiating cells(LTCIC)的测定
　　
　　将收罗的MNC与骨髓基质细胞配合培养、培养4到5周，然后再行甲基纤维素法培养，计算出 LTC-IC，LTC-IC是能够检测到最接近造血干细胞的早期祖细胞检测要领。改善的LTC-IC培养要领将培养时间耽误8周，可以获得更为接近造血干细胞的祖细胞。由于LTC-IC培养时间长，操纵繁琐，目前临床较少作为PBSCT时检测造血干/祖细胞的要领。
　　
　　3、CD34+细胞测定
　　
　　CD34是80年代中期发明的一种细胞外貌分子，在未成熟的造血细胞及所有具有造血潜能的集落形成细胞上表达。CD34+细胞在正凡人骨髓MNC中约占1-4％，未经带动的外周血MNC中约为0.2％，带动后的外周血MNC中可达1％。临床应用功效证明，输入必然量的CD34+ 细胞，可恒久重建造血。同时输入的CD34+细胞数同移植后造血植活速度呈正相关。最近有报道认为CD34-细胞可能更接近造血干细胞，但目前临床上仍回收已被实践证明的 CD34+细胞数作为造血干/祖细胞的测定指数。
　　
　　由于CD34+细胞在骨髓、外周血及脐带血中含量均低、加之影响测定功效的因素较多，如标本制备历程中是直接标志全血，照旧MNC，是否洗涤，CD34抗体种类的差异及阐明要领差别等均可影响CD34+功效，造成测定功效的准确性和可反复性较差。
　　
　　基于上述原因，国际上已提出几种尺度化方案。个中之一是国际血液治疗与移植工程方案（ISHAGE），回收4个参数：CD34-PE、CD45-FITC、SSC和FSC，用累积设门法阐明，检丈量少， 75000个CD45+细胞及100个CD34+细胞。
　　
　　另一种为三色方案，引用一种称为7-AAD的核酸染料撤除死细胞、另外两种荧光别离为CD14- FITC和CD34-PE，同时设同型比较，依据FSC和SSC确定有核细胞。其商品化试剂盒为Procount，该试剂盒不单可测出CD34+细胞占有核细胞的百分比、还可测出CD34+细胞绝对数。北京大学人民医院用Procount检测脐带血和外周血CD34+细胞，可极大减少在处理惩罚技术与阐明中工钱误差，是一种较好的CD34+测定要领。

　　四、外周血造血干细胞的带动
　　
　　在不变的造血环境下，人外周血中仅有少量造血干/祖细胞存在，不能满足PBSCT的需要，因此，如何增加外周血造血干/祖细胞数量, 即带动出足够数量的造血干/祖细胞，担保PBSCT乐成、是PBSCT技术中的重要环节，也是PBSCT有别于骨髓移植之处。
　　
　　常用造血干细胞的带动要领：
　　
　　1、化疗药物
　　
　　骨髓抑制性细胞毒药物化疗后，在骨髓造血成果规复期，外周血造血干/祖细胞呈一过性增加，此时用血细胞疏散机可收罗到足够数量的造血干/祖细胞。常用于很多恶性肿瘤性疾病auto- PBSCT的带动。该要领是第一种被临床遍及应用的外周血造血干细胞带动要领。又分为大剂量单一药物和联适用药两种方法。(1)单一药物中以大剂量环磷酰胺为最常用的要领，凡是为4- 7g/m2。别的另有大剂量足叶乙甙、阿糖胞苷等；(2)联合化疗，也是一种常用的带动要领。按照差异疾病选择相应的联合化疗方案，如AML患者回收TAD方案（柔红霉素+阿糖胞苷+6-巯鸟嘌呤）；多发性骨髓瘤的CAVB方案（环磷酰胺+阿霉素+长春新碱+泼尼松）；淋巴瘤的CHOP方案（环磷酰胺+阿霉素+长春新碱+泼尼松）等。
　　
　　上述方案各有优缺点，如单一药物要领，骨髓抑制强度大易引起因白细胞减少造成的传染、血小板减少引起的出血。同时单一化疗可能倒霉于原有肿瘤疾病的固定治疗。联适用药时骨髓抑制的强度不等，有可能带动不出足够数量的造血干/祖细胞、从而造成带动失败。总之，化疗药物带动外周血造血干/祖细胞时，其化疗方案需到达足够强的骨髓抑制水平，才可担保带动的乐成；而对付那些接受过重复多次化疗或其他因素所致的骨髓成果衰竭者，往往带动不出足够数量的PBSC。别的，该要领带动效率不高、常需疏散3-4次，且自己副感化较大，目前临床上还很少使用。